C18液相色譜柱用于分離樣品,是整個色譜系統(tǒng)的心臟。其質量直接影響分離效果,檢測器將連續(xù)流動的樣品組分轉換為易于測量的電信號,由數據系統(tǒng)接收,以獲得樣品分離的色譜圖。記錄儀或數據工作站對色譜數據進行處理,參與HPLC儀器的自動控制。隨著技術的日益成熟和性能的不斷提高,它已成為分離復雜多組分混合物和多項目分析的主要方法,在各個領域有很大的取代填充柱的趨勢。
今天給大家分享一下C18液相色譜柱的操作方法:
1、有條件的情況下,新產品使用前按人工方法進行柱效測試,確保正常。
2、工作溫度應低于60℃。
3.將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫,樣品需要溶解在原始流動相或類似極性的溶劑中。樣品溶液不應含有任何顆粒物,應使用粒徑為0.5μm或更小的過濾器進行過濾。如果樣品溶液中使用了強溶劑,為了獲得更好的峰形,需要減少進樣量。
4、所有流動相,尤其是含有緩沖鹽的流動相,應在實驗當天準備好;如果使用前一天配制的流動相,請確保流動相的pH值不發(fā)生變化,且流動相不會滋生細菌。流動相的pH值取決于您的應用和色譜柱填料的類型。
當復雜的樣品溶液通過吸附劑時,吸附劑通過極性相互作用、疏水相互作用或離子交換選擇性地保留目標物和少量與目標物性質相似的組分,而其他組分穿透吸附劑流出小柱,再用另一種溶劑體系選擇性洗脫目標化合物,從而實現復雜樣品的分離、純化和富集。在固相萃取過程中,“保留”和“洗脫”受三個因素的影響:目標、吸附劑和溶劑。對于給定的目標,選擇合適的吸附劑、樣品溶劑和洗脫溶劑是成功分離的關鍵。